IRAC 2010 Espec CLASIFICACIÓN, MICROMANIPULACIÓN Y CONGELADO DE EMBRIONES BOVINOS Fecha: 30/9/2012 Nombre y Apellido: Francisco Franganillo Objetivo: 1. Transferir lo estudiado a lo largo del curso en la resolución de las actividades presentadas. Criterios de evaluación: 1. Manejo conceptual, nivel de profundización y capacidad para establecer relaciones. 2. Capacidad crítica y posibilidad de realizar análisis personales. 3. Integración y transferencia de lo estudiado a situaciones concretas. 1. Observe las fotografías de embriones y en base al Sistema de Evaluación de embriones de la Sociedad Internacional de Embriones (IETS) haga una clasificación de los embriones según: a. el estadio de desarrollo b. la Calidad (grado 1,2,3,4). c. Explique para cada fotografía la/s característica/s que tuvo en cuenta para calificar los embrión. Morula, grado 1, (estadio de desarrollo 4, grado 1) Se observa una mórula bien definida sin metámeras sueltas, ni degeneración alguna Blastocito grado 3, (Estadío de desarrollo 6, grado 3) Se observa un blastocito con gran parte de su masa celular degenerada, a la izquierda de la imagen, que correspondería aproximadamente al 50 % del total de células IRAC Espec 2010 Blastocito expandido grado 1 (estadío de desarrollo 7, grado 1) Se obvserva un Blastocito expandido con la mayor parte de su masa celular intacta Blastocito expandido grado 2 (estadío de desarrollo 7, grado 2) Se observa un Blastocito con gran parte de la masa celular intacta, entre el 50 y el 84 % aproximadamente Mórula grado 2 (Estadío de desarrollo 4, grado 2) Se observa una mórula con mas del 50% de su masa celular intacta. Mórula grado 2 (Estadío de desarrollo 4, grado 2) Se observa una mórula con mas del 50% de su masa celular intacta. Mórula grado 2 (Estadío de desarrollo 4, grado 2) Se observa una mórula con mas del 50% de su masa celular intacta. IRAC Espec 2010 Infertilizado grado 4 2. Realice una comparación entre el método de congelado de embriones con etilenglicol y la vitrificación teniendo en cuenta: medios de congelado, toxicidad, curva de congelado, método de descongelado y practicidad (costos, entrenamiento, etc.). La congelación de embriones con etilenglicol tiene muchas ventajas que han facilitado y optimizado su utilización a campo, además de facilitar el comercio internacional de genética. Los embriones son congelados en soluciones 1,5M, con tasas lentas de congelamiento (Descenso lento y controlado de la temperatura, 0,3 a 1,0 °C/min) Otra ventaja es la transferencia directa sin la necesidad de retirar el crioprotector después del descongelado. La pajuela con el embrión se descongela rápidamente (aproximadamente a 250°C/min, para evitar recristaización) en agua y el contenido de la pajuela es depositado directamente en el útero de la receptora utilizando una técnica similar a la inseminación artificial. No hay necesidad de utilizar microscopio o de llevar a cabo procedimientos de dilución muy complicado. Una vez en el útero, el crioprotector sale del embrión y éste se hidrata con agua de los fluidos del tracto reproductivo. La Vitrificación es una técnica de criopreservación que consiste en un proceso de enfriamiento que permite la formación del estado vítreo de una solución, por medio de la extrema elevación de la viscosidad sin la presencia de cristalización. Esta formación del estado vítreo va a promover la distribución iónica del líquido, impidiendo la formación de cristales de hielo. De esta forma, este procedimiento, reduce la ocurrencia de los daños químicos y mecánicos que existen durante el enfriamiento. En la vitrificación las curvas de enfriamiento serán más rápidas en comparación a las del congelamiento y serán usualmente asociadas con concentraciones mayores de crioprotectores (4-8M vitrificación vs. 1-2M congelamiento) Existe la posibilidad de daños tóxicos, por las altas concentraciones de crioprotectores, y de daños osmóticos, debido a las alteraciones en el volumen celular Concluyendo se puede decir que: el congelamiento con etilenglicol posee varia ventajas sobre la vitrificación, entre las que se encuentran la practicidad, tanto en congelado como descongelado, la aplicabilidad de la técnica a campo, la menor toxicidad, y el menor costo. Básicamente es un método simple y comercialmente eficiente.