IRAC 2013 CLASIFICACIÓN, MICROMANIPULACIÓN Y CONGELADO DE

IRAC
2013
Espec
CLASIFICACIÓN, MICROMANIPULACIÓN Y CONGELADO DE
EMBRIONES BOVINOS
Fecha: 16-4-14
Nombre y Apellido: Efrain Quintero
Objetivo:
1. Transferir lo estudiado a lo largo del curso en la resolución de las actividades
presentadas.
Criterios de evaluación:
1. Manejo conceptual, nivel de profundización y capacidad para establecer
relaciones.
2. Capacidad crítica y posibilidad de realizar análisis personales.
3. Integración y transferencia de lo estudiado a situaciones concretas.
1. Observe las fotografías de embriones y en base al Sistema de Evaluación de
embriones de la Sociedad Internacional de Embriones (IETS) haga una
clasificación de los embriones según:
a. el estadio de desarrollo
b. la Calidad (grado 1,2,3,4).
c. Explique para cada fotografía la/s característica/s que tuvo en cuenta
para calificar los embrión.
1- Blastocisto temprano grado 1: presenta una
diferenciándose el trofoblasto del macizo celular interno.
cavidad
con
fluido
2- Blastocisto grado 2: Se nota una zona pelúcida amplia y delgada con un
amplio espacio perivitelino. El trofoectodermo y macizo celular interno
colapsado.
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3- Mórulas compactas grado 1: se nota la compactación perfecta del embrión y
un amplio espacio perivitelino, ocupando el embrión el 60% (aproximadamente)
de dicho espacio.
4- Embrión en división bloqueado (2 celulas). Se nota una gran célula que no
prosiguió su división. La imagen no es tan clara como para determinar si el otro
fragmento corresponde a otra celula sin dividir, o a una compactación o
agregado celular.
5- Mórula en compactación grado 2: contorno irregular indicando estadio de
mórula, pero es grado 2 por tener fragmentos celulares en el borde superior sin
compactar.
6- Embrión degenerado: Se notan diversos restos de celulares difusos,
simulando blastómeros degenerados y una célula definida en su interior.
7- Ovocito no fertilizado: Se nota su contorno totalmente lineal y pérdida parcial
del citoplasma, lo cual indica que no fertilizó.
2. Realice una comparación entre el método de congelado y la vitrificación de
embriones teniendo en cuenta: medios de congelado, toxicidad, curva de
congelado, método de descongelado y practicidad (costos, entrenamiento,
etc.).
TOXICIDAD: Los medios utilizados en la vitrificación son altamente toxicos
para las células por su alta concentración de alcoholes utilizados en su
formulación. De allí que el tiempo de exposición a los embriones sea muy
cortos para evitar daños. A diferencia de la vitrificación, el medio usado en
congelación lenta es menos toxico, de allí su exposición a un prolongado
tiempo con los embriones.
CURVA DE CONGELACION: el método de congelación embrionaria
tradicional, es conocido también con el nombre de congelación lenta. Se
necesitan de equipos programados, que hagan descender la temperatura
periódica y progresivamente hasta llegar a una temperatura (-30°C), que nos
permita pasar los embriones directamente al N2. Es un proceso que dura más
de una hora, de allí que su curva de congelación es lenta. El método de
vitrificación también es conocido como congelación ultra rápida. Se necesitan
de soluciones altamente concentradas, que permitan en un corto tiempo
reemplazar el agua en el embrión y poderlo pasar directamente sobre el N2 ( 196 °C), y disminuir su exposición por la alta toxicidad. Esto lo convierte en un
método de curva ultra rápida ( +/- 23,000°C). El embrión pasa a un estado
vítreo por su excesiva velocidad de exposición.
DESCONGELACION: La descongelación en el método de congelación lenta es
de un solo paso, es decir directa al utero bovino. No se necesita de paso de
rehidratación para su efectividad. La descongelación en la vitrificación requiere
de pasos de rehidratación con soluciones descendentes de sucrosa.
Generalmente se usas dos a tres pasos, según el protocolo de vitrificación
utilizado antes de transferir.
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PRACTICIDAD: La congelación lenta requiere de muy poca practica y
experiencia para ser llevada a cabo por algún profesional, ya que es efectuada
en gran parte por un congelador automático. Pero sus costos son altos debido
al uso de un congelador programable. La vitrificación, requiere mucho más
práctica, entrenamiento y destreza por los cortos tiempos de trabajo y la
manipulación exacta durante este procedimiento. En cambio, sus costos son
muy bajos, ya que no requiere de ningún equipo especializado para ser llevado
a cabo, solo los medios y los dispositivos de vitrificar.
3. Enumere al menos 3 factores importantes para la obtención de preñeces a
partir de la transferencia de embriones micro manipulados (hemi-embriones)
Factor 1: Exactitud en la división microquirúrgica, evaluando la relación entre
las mitades obtenidas. Si no hay una relación homogénea entre ambas
mitades, se afectara el resultado de la técnica.
Factor 2: Micro instrumento utilizado para dividir los embriones. Considerar el
instrumento apropiado, que permita obtener dos mitades homogéneas.
Factor 3. Estadio embrionario para realizar bisección. Se recomienda utilizar
blastocistos en vez de mórulas, ya que con ayuda de un microscopio se
pueden diferenciar el trofoectodermo y macizo celular interno para una mejor
partición, además, hay mejor unión celular que mantiene el embrión mejor
compacto después de la partición que en otros estadios.