IRAC 2013 Especiaidad 2011 CLASIFICACIÓN, MICROMANIPULACIÓN Y CONGELADO DE EMBRIONES BOVINOS Fecha: 10 de oct de 2013 Nombre y Apellido: Mariana González Objetivo: 1. Transferir lo estudiado a lo largo del curso en la resolución de las actividades presentadas. Criterios de evaluación: 1. Manejo conceptual, nivel de profundización y capacidad para establecer relaciones. 2. Capacidad crítica y posibilidad de realizar análisis personales. 3. Integración y transferencia de lo estudiado a situaciones concretas. 1. Observe las fotografías de embriones y en base al Sistema de Evaluación de embriones de la Sociedad Internacional de Embriones (IETS) haga una clasificación de los embriones según: a. el estadio de desarrollo b. la Calidad (grado 1,2,3,4). c. Explique para cada fotografía la/s característica/s que tuvo en cuenta para calificar los embrión. a. Estadio 4 (mórula) b. Calidad 1 c. Es un embrión aparentemente esférico, con una buena ZP no se ven blastómeras desprendidas, y no son fáciles de distinguir. Está bien compactado. a. Estadio 7 (blastocito expandido) b. Calidad 2 c. La ZP está mas delgada. Hay blastómeras sueltas en una buena proporción. Se observan vesículas. IRAC Especiaidad 2011 2013 a. Derecha: Estadio 4 (mórula). Izquierda: Estadio 1 (infertilizado) b. Dercha Calidad 1. Izquierda calidad 4 c. La estructura de la derecha es un embrión que tiene una buena ZP, aparentemente esferico, no hay blastómeras desprendidas, ni vesículas. Está bien compactado. La estructura de la derecha, no parece tener blastómeras diferenciables y aparentemente están granuladas. a. Estado 4 (mórula) b. Calidad 2 c. El embrión presenta muchas blastómeras desprendidas (cerca del 50%) una buena ZP, pero se observan vesículas. a. Estadio 4 (mórula) b. Calidad 2 c. Presenta una buena ZP, se ven blastómeras compactas, pero una proporción están sueltas ocupando el espacio perivitelino. Aparentemente hay vesículas. a. Estadio 4 (mórula) b. Calidad 2 c. Se observa una ZP de buena calidad, pero gran cantidad de blastómeras están sueltas (cerca del 50%) IRAC 2013 Especiaidad 2011 a. Estadio 5 (blastocito temprano) b. Calidad 1 c. Buena ZP, parece que tiene forma de anillo de sello. Ocupa bastante espacio perivitelino. 2. Realice una comparación entre el método de congelado y la vitrificación de embriones teniendo en cuenta: medios de congelado, toxicidad, curva de congelado, método de descongelado y practicidad (costos, entrenamiento, etc.). Parámetros Embriones congelados Embriones vitrificados Medio de Congelación por medio de Se utilizan tres soluciones, la congelado crioprotectores intracelualres primera a y extracelulares. Se previene ambiente la formación de cristales se luego reemplaza el es se agua soluciones intracelular temperatura de equilibrio, pasan de a dos vitrificación con cada vez más densas y por un crioprotectores permeables. tiempo determinado. Luego se cargan en la pajuela enfriada y se congela en nitrógeno. Toxicidad El exceso de tiempo en la El exceso de tiempo en las solución de congelado puede soluciones aparejar algo de toxicidad. puede de congelado aparejar algo de toxicidad. Curva de Se hace una deshidratación Como pasa congelado del embrión a una tasa lenta soluciones de enfriamiento. Se realizan aumentando un descenso lento por varias que van su viscosidad, y cuando se realiza el congelado controlado de la temperatura es relativamente rápido. Se hasta los -30°C o -35°C. logra el estado vítreo. IRAC 2013 Especiaidad 2011 Método de Rápido. Se puede descongelado transferencia directa. hacer Un poco más lento, debe pasar por soluciones descongelado para de ir hidratando el embrión. Practicidad El congelamiento del embrión Al igual que en la congelación, requiere más tiempo pero es se requiere práctica para la muy práctica la transferencia búsqueda y clasificación de los directa, dado que nos permite embriones, sin embargo la transferir sin necesidad de vitrificación no requiere equipo buscar el embrión, requiere especializado práctica en la como una búsqueda, congeladora de embriones. El clasificación y congelación de costo del procedimiento puede los embriones. Además para ser influido por el de las congelar es necesario equipo soluciones de vitrificación. La especializado. técnica de vitrificación es sencilla y no requiere mucho entrenamiento. 3. Enumere al menos 3 factores importantes para la obtención de preñeces a partir de la transferencia de embriones micro manipulados (hemi-embriones) 1. El estadio del embrión. Se obtienen mejores resultados con las mórulas que con los blastocitos, dado que estos últimos deben tener una proporción de MCI en cada hemi-embrión. 2. La calidad. Solo se deberían usar embriones de calidad excelente o muy buena porque necesitan la mayor cantidad de células viables. 3. El corte del hemi-embrión debe ser lo más parejo posible, Si hay mas de un 20% de diferencia entre uno y otro el porcentaje de preñez disminuye.