XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ESPECÍFICA DE LA ENZIMA CATEPSINA B DE CAMARÓN BLANCO (Litopenaeus vannamei) A DIFERENTES VALORES DE pH. Est. QBC. Kathia Itzel Ramírez Armenta1, Dr. Julio Humberto Córdova Murueta2. 1 2 Departamento de Ciencias Químico Biológicas. Universidad de Sonora, Unidad Regional Centro. Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, Unidad La Paz. jcordova@cibnor.mx Planteamiento del problema Proteasas lisosomales, llamadas catepsinas, principalmente de la clase serino y cisteíno proteasas, catalizan la hidrólisis de una amplia variedad de sustratos proteicos, actividad clave para diversos procesos fisiológicos (Barret, 1977). Las catepsinas se encuentran en diversos tejidos y sus concentraciones varían dependiendo del tipo de célula (Argarwal, 1990). Si bien en mamíferos la catepsina B ha sido ampliamente estudiada, en invertebrados se tienen pocos reportes de su caracterización. El objetivo principal es evaluar la actividad específica de la enzima catepsina B de Litopennaeus vannamei a diferente pH con la finalidad de iniciar la caracterización bioquímica de la enzima. Metodología La actividad específica se cuantificó utilizando el sustrato Z-arg-arg-7-amino-4metilcoumarin (SIGMA C-5429). La mezcla de reacción consistió en 10 µL extracto enzimático de glándula digestiva de camarón con 20 µL de sustrato y 70 µL de amortiguador de acetato de sodio 100 mM, DTT 2 mM, EDTA 1.5 mM y Tritón X100 al 0.05%. Se registraron los valores de fluorescencia emitida a 440nm, durante 5 min con intervalos de lectura cada 30 segundos (Stephens, et. al. 2012). Los valores de pH a evaluar fueron 4, 5, 5.5 y 6. Conclusiones Los resultados obtenidos muestran una actividad enzimática óptima a pH 6.0 con respecto al resto de los valores de pH evaluados. Esto podría explicarse en función de la actividad de la enzima, si bien se sabe que es una enzima lisosomal, se ha visto que tiene participación a nivel digestivo en camarón ya que el jugo gástrico donde participa como proteasa digestiva varía entre 5 y 6. En estudios posteriores se evaluará el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática de la catepsina B, así como constantes catalíticas y la identificación de la proteína en el perfil de peptidasas de la glándula digestiva lo que permitirá una caracterización bioquímica completa que proporcionará un mejor entendimiento de la función de esta enzima en organismos invertebrados marinos. © Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del Pacífico Agosto 2014