Práctica nº3 Práctica 3: RECUENTO CELULAR SANGUÍNEO Preparación de muestras sanguíneas con líquido de Türck y PBS: Material: • • • • • Sangre capilar Líquido de dilución: PBS (Solución salina fisiológica)para visualizar eritrocitos Líquido de dilución (Líquido de Türck)para visualizar leucocitos Pipetas dilutorias o microcapilar calibrado Cámara de Neubauer Microscopio La pipeta dilutoria tiene una dilatación proximal que permite realizar una dilución 1/100. Si solo se enrasa la pipeta hasta 0,5 el valor de dilución será 1/200. Método: Desinfectar el dedo que va a ser punzado. Con una lanceta, realizar una punción en el lateral de la yema y presionar el dedo para que salga más sangre. Extracción de 0,5µl de sangre Con una pipeta calibrada a 0,5µl, coger sangre e introducirla en los tubos eppendorf que contienen ya uno el líquido de Türk (100μl) y el otro el PBS (1000 μl) homogeneizando la mezcla. Coger 1µl de sangre y ponerla en un portaobjetos poner un cubreobjetos y mirar al microscopio los leucocitos. Coger sangre mezclada con líquido de Türk y colocarla en la cámara de Neubauer hasta que quede llena la parte central. Colocar un cubreobjetos. Por capilaridad el líquido embadurna todo el cuadrado y los consiguientes. Tras el recuento de leucocitos, lavar convenientemente la cámara 1 1 2 1 Tubos eppendorf: 1. Sangre + Turck 2. Sangre + PBS 2 Práctica nº3 de Neubauer y realizar la misma operación con la preparación con PBS. Recuento de leucocitos: Método de recuento: Mirar al microscopio la cámara de Neubauer, y realizar el recuento según los cuadraditos. A la hora de contar hay que hacer un consenso sobre como contar los leucocitos que están sobre una raya de manera a no contar el mismo dos veces en cuadrados diferentes; por ejemplo, solo contar los leucocitos que están sobre las rayas de arriba y la izquierda: Contar en un grande (los negros de cada unos 16 cuadraditos) cuantos leucocitos hay, los veremos por la coloración que experimentan sus núcleos. Cuando tengamos el númerode leucocitos que hay en uno de los cadrados, aplicaremos la formula El valor normal es entre 5000 y 10000. Cuando hayamos hecho el recuento del número de leucocitos de una de las áreas del cuadro (los leucocitos de los 16 cuadritos) aplicaremos la siguiente fórmula: ( Nº de leucocitos en el cuadrado negro X 4(cuadrados grandes) X 20 factor de dilución X 10 Volumen muestra) / 4 En nuestro caso contamos 52 leucocitos en un cuadrado grande por lo que según el cálculo el valor de leucocitos es de 10400 es alto ya que el valor fisiológico de leucocitos es de entre 5000 y 10000.