Malassezia - Universidad Católica Argentina
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“Curso Universitario de MICOLOGÍA CLÍNICA” U.C.A. - 2009 Malasseziosis Dr. Gustavo E. Giusiano Cátedra de Microbiología, Parasitología e Inmunología – Fac. de Medicina Departamento Micología – Instituto de Medicina Regional Universidad Nacional del Nordeste ( Argentina ) Morfología y Fisiología Brotación unipolar de base ancha prominente cicatriz en la célula madre Hongo levaduriforme Células globosas, subglobosas, ovales, cilíndricas Morfología y Fisiología Lipo-dependientes Defecto en la síntesis de ac. grasos Excepto M. pachydermatis requieren la presencia de sustancias lipídicas para su desarrollo Malassezia Fase levaduriforme Morfología variable e inestable Fase micelial Estados simples en el ciclo de vida del hongo Historia 1846 Eichstedt 1853 Robin 1874 Malassez 1889 Baillon 1904 Sabouraud 1913 Castellani y Chalmers 1927 Panja 1925 Veidman primero en describir el hongo asociado a la PV Propone el nombre de Microsporon furfur células brotantes de varias formas en el estrato córneo de pacientes con varias enfermedades de piel Crea el género Malassezia (M. furfur especie tipo ) Género Pityrosporum con una fase micelial Malassezia furfur introdujeron el nombre de P. ovale primer aislamiento ??? Pityrosporum pachydermatis aislada de animales Historia 1951 Gordon una tercer especie: P. orbiculare (x morfologia) 1986 (Robin) Baillon Estudios micológicos, inmunológicos y genéticos confirman la inestabilidad morfológica Unificación de la nomenclatura Malassezia P. ovale, P. orbiculare y M. furfur P. pachydermatis 1990 Simmons y Guèho 1996 Guillot y Guèho Malassezia furfur M. pachydermatis M. sympodialis M. globosa, M. restricta, M. obtusa, M. slooffiae Clasificación de Malassezia Malassezia furfur Malassezia sympodialis Malassezia globosa Malassezia slooffiae Malassezia obtusa Malassezia restricta Malassezia dermatis Malassezia japonica Malassezia yamatoensis Malassezia pachydermatis Malassezia nana Malassezia equii - Nell et al. 2002 Malassezia caprae - sp. sp. nova – 2007 Cabañ Cabañez et al. Malassezia equina – sp. sp. nova – 2007 Cabañ Cabañez et al. especies Malassezia biota cutánea normal de la piel áreas seborreicas La densidad de Malassezia en piel de individuos sanos es alta a partir de la pubertad, con el incremento en el actividad de las glándulas sebáceas y decrece con la edad debido a la reducción en el nivel de lípidos de la piel. Afecciones asociadas con el género Malassezia • Pitiriasis versicolor • Foliculitis • Dermatitis seborreica • Dermatitis atópica • 2ria a otras afecciones de piel • Infecciones sistémicas Pitiriasis versicolor Infección superficial crónica, leve y gralmente. asintomática Máculas en el estrato córneo, hipo o hiperpigmentadas con descamación fina. (color café – rosado - blanco) Cual es la causa? Bloqueo en la transferencia del melanosoma al keratinocito Apoptosis de los melanocitos por las malassezinas Inhibición de la producción de melanina: • metabolitos: ác. dicarboxílicos como el ác. azelaico, intoxican los melanocitos e inhiben la tirosinasa (ez. clave en la melanogénesis) Mayor infiltrado inflamatorio de las lesiones actuaría como estímulo para los melanocitos, resultando en mayor producción de pigmento. Puede ocurrir a cualquier edad, incluido en lactantes, (siendo poco frecuente en niños menores de 5 años) mayor incidencia adolescencia y la edad media glándulas sebáceas más activas CONTAGIOSIDAD ??? escasa Se produce ppalmente por factores propios y externos FACTORES ENDOGENOS: hacen de la piel un lugar fértil para la proliferación de Malassezia • Piel grasa • Exceso de transpiración o hiperhidrosis • Predisposición genética • Malnutrición FACTORES EXÓGENOS: • Elevada temperatura y humedad ambiente distribución mundial Pitiriasis versicolor más prevalente en áreas cálidas y húmedas o tropicales 30 y 40% de la población gral presentaciones más extensas y severas MAYORES RECURRENCIAS Recidivas luego del tratamiento índice de recurrencia en zonas tropicales 60% al año 80% a los 2 años. cura permanente es difícil de lograr Cronicidad Diagnóstico diferencial Pitiriasis rosada Pitiriasis alba Vitiligo Sífilis secundaria Diagnóstico TOMA DE MUESTRA Examen directo Raspado KOH 20 – 40% + Tinta Parker Azul de metileno 1% Blanco de Calcofluor como método más selectivo (mejor visualización), especialmente en DS y otras afecciones de piel Pitiriasis versicolor Examen directo Se ha demostrado que no todos los aislados de Malassezia son capaces de producir la transformación a la forma micelial Alcaloide indólico Pityrialactonas Luz de Wood fluorescencia con un característico color oro o amarillo vivo positivo en 1/3 de los casos Malassezia Produce fosfolipasas Individuos con DS Mayor cantidad de lípidos sobre la piel Liberación de ac. araquidónico Metabolitos involucrados en la inflamación en la piel mecanismo por el cual Malassezia puede generar una inflamación DERMATITIS Dermatitis seborreica Malassez en 1874 fue el primero en asociar a Malassezia con descamaciones del cuero cabelludo la relación entre DS y Malassezia fue ya sugerida por Saboraud en 1932 Actualmente Malassezia considerado importante en la etiología de la DS • observación del alto numero de estos agentes en los materiales obtenidos de DS • efectividad de los tratamientos antimicóticos • la recolonización en los casos de recurrencia Clínicamente se presenta como descamación e inflamación en áreas del cuerpo ricas en glándulas sebáseas cuero cabelludo pecho oídos también en axilas e ingle espalda Frente y surcos nasolabiales CARA: Frente, surco nasolabial, zona de la barba PECHO ESPALDA OIDO en inmuno-competentes Incidencia después de la pubertad BAJA en personas normales Estados inmunológicos deprimidos stress físico o mental crónica con exacerbaciones frecuentes La DS infantil generalmente remite espontáneamente después de los 6 meses. Raramente persiste pasado el año de vida Caspa forma descamativa no inflamatoria de la DS confinada al cuero cabelludo Diagnóstico Examen directo KOH 20 – 40% + Tinta Parker Azul de metileno 1% Blanco de Calcofluor como método más selectivo (mejor visualización), especialmente en DS y otras afecciones de piel Malassezia Produce oclusión folicular Sobrecrecimiento en el folículo piloso Favorecido por factores externos y/o a la reducida resistencia por parte del hospedador productos de la levadura y los ác.grasos libres producidos como resultado de la actividad lipasa Inflamación Presentación clínica pápulas foliculares y pequeñas pústulas (granos) pruriginosas (erupciones tipo acné) Ocurre principalmente en Pecho Espalda Brazos Cara Factores favorecedores FACTORES EXÓGENOS: • Calor y humedad ambiente • Aplicación de sustancias grasas, emolientes oleosos (aceites) • Oclusión (impide la aireación) Uso de ropas sintéticas favorecen la proliferación de Malassezia • Piel grasa FACTORES ENDOGENOS: • Stress y fatiga • Diabetes • Tratamientos con esteriodes orales (Ej: prednisona) • Tratamientos inmunosupresivos • Anticonceptivos • Elevado peso, que resulta en más sudoración y zona ocluidas. • Antibioticoterapia oral, como tetraciclinas, eliminan la capacidad de competición entre bacteria y levaduras saprofitas de la piel, favoreciendo el desarrollo de estas últimas Diagnóstico Los exámenes microscópicos directos y la histopatología muestran la presencia de abundante Malassezia en el folículo pilo-sebáceo. Malassezia en folículo piloso Examen directo Malassezia Alergeno en lesiones de eczemas atópicos en zonas seborreicas barrera cutánea afectada contacto con sistema inmune factor exacerbador Dermatitis atópica Inflamación crónica de la piel, de etiología a veces discutida. La etiología de la DA es considerada como una reactividad cutánea anormal a alergenos, con una predisposición genética Lesiones eczematosas, inflamativas, descamativas y pruriginosas en lesiones de DA en zonas seborreicas • Cuero cabelludo • Cara • Cuello • Espalda Dermatitis atópica Examen directo DA Asociaciones con otras afecciones superficiales Ha sido comprobada la asociación de Malassezia con otras afecciones superficiales, entre ellas: • • • • • • • Psoriasis Acne vulgaris Dacriocistitis Blefaritis seborreica Pustulosis neonatal Papilomatosis confluente y reticulada Onicomicosis???????? Psoriasis La sobre infección por Malassezia de la psoriasis pueden causar una exacerbación el tratamiento de ella resulta en un mejoramiento de la afección Probablemente contribuye con la inflamación asociada con esta enfermedad. Otras asociaciones Acné vulgaris La foliculitis por Malassezia puede coexistir con casos de acné Favorecido por el incremento de sustancias grasas en la piel Malassezia contribuye a la inflamación presente en las lesiones de acné. Pacientes con acné verdadero pueden estar acompañados de Malassezia En estos casos hay un sobrecrecimiento tanto de bacteria como de levaduras Se ha comprobado que la foliculitis por Malassezia a veces resulta ser la razón de los casos de acné que no mejoran con tratamientos antibióticos prolongados ya que ambas pueden coexistir Diagnóstico Cultivo Requiere de ácidos grasos para su desarrollo Medios de cultivos especiales Temp: 31º y 35º, ideal 32ºC. Medio de Dixon Medio de Leeming y Notman Medio de Sabouraud + aceite de oliva • poco rendimiento • no desarrollan todas las especies o sobrevida corta Tipificación Métodos convencionales Cultivo Estudio Macro y Micro-morfológico No satisfactorio Pruebas bioquímicas y fisiológicas Macromorfología Colonias no diferenciables variación en las colonias Micro morfología: difícil observación Identificación Crecimiento en Sabouraud Crecimiento en medios adicionados con lípidos Catalasa desarrollo M. pachydermatis POSITIVA NEGATIVA M. restricta Crecimiento a 32ºC, 37ºC y 40ºC, Asimilación de Tween 20 - 40 – 60 - 80 Malassezia spp. Physiological characteristics of Malassezia speciesa Species Growth on SAb at 32°C Growth on mDixonc at 32°C 37°C 40°C Catalase reaction Utilization of: 10% Tween 20 0.5% Tween 40 0.5% Tween 60 0.1% Tween 80 M. japonica sp. nov. - + + - + - ± + - M. slooffiaed - + + + + ± or + + + - M. sympodialisd - + + + + - + + + M. furfurd - + + + + + + + + M. dermatis - + + + + + + + + M. globosad - + ± or - - + - - - - M. obtusad - + ± or + - + - - - - M. restrictad - + + - - - - - - M. pachydermatisd + + + + ± or + - + + + a +, positive; -, negative; ±, weakly positive. b SA, Sabouraud dextrose agar. c d mDixon, modified Dixon agar. Data are from Guého et al. (7). M. globosa – M. obtusa - M. restricta M. furfur – M. sympodialis – M slooffiae características fisiológicas similares Patrones de asimilación semejantes Identificación Crecimiento en Sabouraud Crecimiento en medios adicionados con lípidos Catalasa desarrollo M. pachydermatis NEGATIVA M. restricta Crecimiento a 32ºC y 40ºC, Asimilación de Tween 20 - 40 – 60 - 80 Pruebas adicionales: Asimilación de Cremophort EL (M. furfur) Producción de pigmento en medio con L-triptofano (M. furfur) Detección de β-glucosidasa (hidrólisis de la esculina) (M. sympodialis) POSITIVA Pruebas adicionales: Producción de pigmento en medio con L-triptofano M. furfur Sensibilidad = 75,36% n = 233 Especificidad = 95,83% Asimilació Asimilación de Cremophort Pruebas adicionales: Detección de β-glucosidasa (hidrólisis de la esculina) M. sympodialis Sensibilidad = 64% n = 233 Especificidad = 97,1% M. furfur no asimila Cremophort 34% M. slooffiae hidroliza la esculina 15% M. slooffiae no toleran los 40ºC 14,6% Kaneko, T. et al. J Clin Microbiol, 2007 Nuevas especies M. dermatis y M. furfur se diferencian solo en el mol % G+C Las mismas características fisiológicas y bioquímicas Identification por métodos convencionales Desventajas • • • Colonias no diferenciables – variación en las colonias Micromorfología: difícil observación Identificación por cultivo en medios adicionados con Tween para ver asimilación : – Necesita experiencia en la interpretación de las zonas de crecimiento (asimilación) Resultados poco claros e inespecíficos. – M. furfur – M. sympodialis – M slooffiae son fisiológicamente similares, por lo tanto tienen patrones de asimilación semejantes – Lo mismo ocurre con M. globosa – M. obtusa y M. restricta. M. obtusa puede distinguirse por su diferente morfología y M. restricta por ser la única especie catalasa negativa. – Las nuevas especies tienen características fisiológicas semejantes M. dermatis y M. furfur solo difieren en el mol % G+C – NO permite detectar asociaciones Identificación Caracterización genotípica Métodos de Biología molecular PFGE (Electroforesis de campo pulsante) RAPD (Amplificación randomizada del DNA nuclear) PCR – RFLP (PCR – fragmentos de restricción de largo polimórfico) PCR – REA (PCR – análisis de restricción enzimática) • • • • Es precisa. Analiza solo 1 región genómica LSU rRNA. Es práctica y por lo tanto rápida. Menor costo Detección de asociaciones Epidemiología Incidencia y frecuencia de especies de Malassezia Diferentes regiones geográficas Distintas patologías Sitios anatómicos de las lesiones Metodología de Recolección de muestra Aislamiento y cultivo Tipificación Pitiriasis versicolor 50 n= 239 37,7% 37,2% Pacientes: 218 40 30 21,3% 20 10 1,7% 1,3% 0,4% 0,4% 0 M. sympodialis M. globosa M. furfur M. slooffiae M. restricta M. dermatis M.pachydermatis 60 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 43% n= 21 33% 50 40 Dermatitis atópica 36,4% 30 14,1% 4,5% 4,5% 10 0 M .f ur fu r M .g lo bo sa M .f ur M .s fu r ym po di al is M . re M str .p ict ac a hy de rm at is 10% 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 40,8% 25,4% Dermatitis seborreica n= 65 14,1% 11,3% 7% M .g lo bo sa M .f M ur .s ym fur po di al M is .r es tri M ct .s a M lo o .p ac ffia e hy de rm tis .s M ym po di al is .s M lo of fia e 14% n= 20 27,3% 20 .g lo bo sa M Foliculitis 1,4% Sensibilidad antifúngica Criterio para determinar CIM o fungicidas Sensible in vitro a los azólicos Ketoconazol Itraconazol Mayor variabilidad frente a: fluconazol, bifonazol, econazol, miconazol, clotrimazol y nuevos azólicos como albaconazol y voriconazol VARIACIONES en la sensibilidad a los azólicos Más sensibles M. sympodialis – M. slooffiae – M. obtusa Menos sensibles M. globosa – M. restricta – M. pachydermatis – M. furfur Terbinafina: actividad menor M. sympodialis la más sensible M. furfur - M. globosa y M. obtusa las más tolerantes Cepas de M. furfur experimentan rangos muy variables
