Diapositiva 1 - Campus Virtual

Teórico práctico Nº 10
Pruebas básicas y especiales para
el estudio de plaquetas y
sistema fibrinolítico
Dra. Ana Cecilia Haro
Coagulación
Fibrinolisis
Hemostasia
Endotelio
Plaquetas
Mecanismo de defensa contra el sangrado
Glóbulo rojo
Pared de un vaso sanguíneo
Plaqueta
Luz vascular
Plaqueta activada
Tapón hemostático
Fibrina
Pruebas de laboratorio
Hemostasia Primaria
 Recuento de plaquetas
 Frotis
 Tiempo de sangría
 Tiempo de retracción de coágulo
Recuento de plaquetas
Método manual
 Muestra: se debe usar EDTA al 2%
 Lisante: Oxalato de amonio al 1%
 Dilución: 1/20 (0,38ml oxalato + 20 µl sangre
entera), reposar 10 minutos.
 Recuento: en cámara
microscopio óptico común.
de
Neubauer
con
Recuento de plaquetas
Método manual
N x 400 x 20 x 10
80
= Nº Plaq / uL
Valor de Referencia: 150 a 400 x 109/ L
Recuento de plaquetas
Método automatizado
PLT
2
PLT
5
10
Crioglobulinas
GR microcíticos
Inclusiones en GR
Fragmentos celulares
15
20
25
Plaq. Gigantes
Microcoágulos
Heparina
30
Tiempo de Sangría (Mét. Ivy)
Depende de la integridad vascular y de la cantidad y calidad
de las plaquetas.
Valores Referencia: 2 a 7 minutos
-Trombocitopatías congénitas: BS , Tromb Glazman
-Trombocitopatías adquiridas: SMD, TE, afribrinog, uremia
Fragilidad capilar
Plaquetas
Vaso y tejidos adyacentes
Presión transmural
MÉTODOS:
1- Prueba del lazo
2- Prueba por succión
Extravasación
sanguínea
Retracción del coágulo
37 ºC
1 hora
Retracción Normal
Se produce por la interacción de la GP IIb-IIIa con la actina del
citoesqueleto produciendo un reordenamiento de la membrana
plaquetaria
Depende de: cantidad y funcionalidad plaquetaria, concentración de Fgno,
hematocrito
Pruebas plaquetarias específicas
1- Adhesividad plaquetaria in vivo: se compara el nº de
plaquetas obtenido por punción venosa y por incisión en el
antebrazo.
T0 - T2
x 100
% adhesividad =
T0
Valores de Ref: 30 a 70%
2- Agregación plaquetaria: es la adhesividad entre
plaquetas, proceso que requiere de la integridad metabólica
de las mismas.
Paciente y muestra:
 El paciente no debe tomar medicamentos que
contengan aspirina y debe suspender (en lo
posible) cualquier medicación.
 Ayuno de 8 hs. Tomar la muestra entre 8 – 10 am.
 Anticoagulante: citrato de Na 3,8% en relación
1/10 según hto.
 PRP: se obtiene por rpm a 180g, conservar
tapado.
Agregación plaquetaria
Cuando a un PRP se le adiciona un agonista, las plaquetas se
agregan, la muestra se vuelve menos turbia y aumenta la
transmisión de luz.
Curvas de agregación plaquetaria
Agonistas:
Trombina
AA
Adrenalina
Colágeno
Ristocetina
agregación
inhibición de la
agregación
SISTEMA FIBRINOLÍTICO
Células
endoteliales
XII
t-PA
Prouroquinasa
PK
KK
Uroquinasa
PAI-1
PAI-1
PLASMINÓGENO
PLASMINA
2-macroglobulina
HRG
SK
2-AP
FIBRINA
pdf
HEMORRAGIA
AUMENTA
PLASMINA
DISMINUYE
TROMBOSIS
Estudio del Sistema Fibrinolítico
Pruebas globales
• Tiempo de lisis sangre entera diluida
• Lisis de euglobulinas
Pruebas específicas
• Dosaje de plasminógeno (método amidolítico)
• Productos generados por la activación del
sistema fibrinolítico: - PDF
- DD
Muestra:
 Realizar la extracción entre las 8 – 10 hs. Algunos
componentes presentan ritmo circadiano de
liberación como PAI y tPA.
 Anticoagulante: citrato de Na 0,11M en relación
1/10 según Hto.
 Factores que potencian el Sist Fibrinolítico:
isquemia, oclusión venosa, ejercicio, frío intenso,
etc.
Factores que disminuyen el Sist Fibrinolítico:
tabaco, diabetes, exceso alcohol, anticonceptivos
orales, hipertrigliceridemia, etc.
1- Tiempo de lisis de sangre entera diluida
Sangre citratada+ acetato de Na + trombina
Tiempo de lisis del coágulo
Valor normal: Tiempo de lisis superior a 18 hs
Depende de: concentración de Fgno, niveles de plasminógeno, FXIII y
del equilibrio entre activadores e inhibidores del Sist Fibrinolítico
2- Tiempo de lisis de euglobulinas
Agua fría
Ac acético
20 min
rpm
+ Borato de Na + CaCl2
4 ºC
PPP
euglobulinas
Valor normal: No debe lisarse antes de las 2 hs
PRODUCTOS GENERADOS POR LA
ACTIVACIÓN DEL SISTEMA FIBRINOLÍTICO
FIBRINÓGENO
PDF
FIBRINOGENOLISIS
PLASMINA
FIBRINOLISIS
FIBRINA
pdf
E
D
E
D
Plasmina
D
D
E
A+B
Plasmina
E
D
D
D
E
D
D
D
E
D
E
D
E
D
D
X0
Y0
D
F XIIIa
E
Yfp
E
D
trombina
Xfp
D
E
E
Plasmina
D
D
D
D
D
DIMERO D
GRACIAS POR SU ATENCIÓN